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Jurkat D,E人T淋巴瘤細胞(Tet-on基因修飾)
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Jurkat D,E 人 T 淋巴瘤細胞(Tet-on 基因修飾)
Jurkat D,E 人 T 淋巴瘤細胞(Tet-on 基因修飾)是在 Jurkat D,E 細胞的基礎上,利用 Tet-on 基因表達調(diào)控系統(tǒng)進行修飾構建的特殊細胞系。Jurkat D,E 細胞源自人 T 淋巴細胞白血病,而 Tet-on 系統(tǒng)的引入,使科研人員能夠?qū)崿F(xiàn)對特定基因表達的**調(diào)控,為研究基因功能和細胞生物學機制提供了強大工具。
從細胞特性來看,Tet-on 基因修飾賦予了 Jurkat D,E 細胞獨特的基因表達調(diào)控能力。Tet-on 系統(tǒng)由四環(huán)素調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活因子(rtTA)和四環(huán)素響應元件(TRE)組成。在缺乏四環(huán)素或其衍生物(如強力霉素)時,rtTA 不能與 TRE 結(jié)合,下游目的基因處于沉默狀態(tài);當加入強力霉素后,rtTA 與 TRE 結(jié)合,從而啟動目的基因的表達。通過這種方式,研究人員可以在時間和表達水平上**控制目的基因在 Jurkat D,E 細胞中的表達,模擬基因在不同生理或病理狀態(tài)下的表達變化。這種特性使得該細胞系能夠有效避免因基因持續(xù)表達對細胞造成的毒性影響,同時可動態(tài)觀察基因表達對細胞增殖、凋亡、信號傳導等生物學行為的影響。
在細胞培養(yǎng)方面,Jurkat D,E(Tet-on 基因修飾)細胞與普通 Jurkat D,E 細胞的基礎培養(yǎng)條件相似。常用含 10% 胎牛血清(FBS)的 RPMI 1640 培養(yǎng)基,添加適量抗生素防止污染,在 37℃、5% 二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞呈懸浮生長,當細胞密度達到 0.5×10? - 1×10? cells/mL 時,需進行傳代,傳代比例一般為 1:3 - 1:5 。由于 Tet-on 系統(tǒng)的存在,在培養(yǎng)過程中如需調(diào)控基因表達,需根據(jù)實驗設計**添加或移除強力霉素。凍存時,采用含有 10% 二甲基亞砜(DMSO)、20% 胎牛血清的凍存液,將細胞置于液氮中保存,以維持細胞活性和 Tet-on 系統(tǒng)的功能完整性。
Jurkat D,E(Tet-on 基因修飾)細胞在科研領域應用廣泛。在基因功能研究中,科學家可以通過該細胞系研究特定基因在 T 淋巴細胞中的功能,以及其對細胞發(fā)育、免疫應答的影響;在信號通路研究方面,可通過調(diào)控目的基因表達,分析相關信號通路的激活與傳導機制;此外,在藥物研發(fā)中,它能夠用于評估藥物對基因表達調(diào)控的影響,篩選靶向基因表達的新型藥物,為疾病治療提供新的策略和靶點。